Aquí tienes el temario explicado en el vídeo anterior. Si tienes alguna duda plantéala en el sistema de comentarios del final de la página.
Técnicas de tipificación de los antígenos HLA
Técnicas basadas en el DNA
Las técnicas basadas en el DNA identifican la secuencia de nucleótidos de los distintos alelos de HLA contenidos en el DNA del individuo. Estas técnicas incluyen tanto la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), como la secuenciación de genes HLA, más utilizada en la actualidad.
Técnicas serológicas
Las técnicas serológicas identifican las moléculas HLA presentes en la superficie de las células mediante el uso de suero con anticuerpos anti-HLA. Los anticuerpos pueden ser policlonales, obtenidos de seres humanos, o monoclonales, obtenidos de ratón. Existen dos fuentes naturales para la obtención de suero rico en anticuerpos anti-HLA:
- Mujeres multíparas: el feto que tiene en su interior posee moléculas HLA del padre, que para la madre son extrañas. Dado que se genera una respuesta de memoria, en su suero existen anticuerpos anti-HLA del padre.
- Individuos politrasfundidos: en su suero existen anticuerpos anti-HLA frente a los an- tígenos propios del donante.
(Reproducido de Regueiro J.R., López C., González S. & Martínez E. (2011) Inmunología. Biología y Patología del Sistema Inmune. (4ª Ed.) Editorial Médica Panamericana, Madrid.)
La
metodología de las técnicas serológicas se resume a continuación:
- Aislamiento de células del paciente. Inicialmente se obtiene sangre venosa periférica del paciente, manteniéndola anticoagulada. Para estudiar antígenos HLA de clase I, se aís- lan linfocitos T y B de la muestra de sangre mediante un gradiente de densidad (Fi- coll™). Para estudiar antígenos HLA de clase II, se aíslan linfocitos B de la muestra de sangre mediante beads (esferas magnéticas) recubiertas de anticuerpos anti-CD19.
- Poner en contacto las células aisladas con sueros que contengan anticuerpos anti-HLA conocidos. Incubar el tiempo suficiente para permitir la reacción antígeno-anticuerpo.
- Revelar la reacción antígeno-anticuerpo mediante la adición de complemento de conejo, que se activa y lisa la célula cuando se ha producido la reacción. Poner de manifiesto el revelado mediante el uso de colorantes vitales (azul tripán, eosina,…) al microscopio óptico, o mediante fluorocromos que tiñan el DNA de las células muertas un microscopio de fluorescencia (Figura 10.12).